豬5核苷酸酶(5-NT) ELISA 試劑盒  

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被相關(guān)指標(biāo)的抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

豬5核苷酸酶(5-NT) ELISA 試劑盒  

樣本處理

在處理樣本時，需要保證無菌操作，避免污染。同時，需要按照試劑盒說明書的要求，將樣本進行適當(dāng)?shù)南♂尯吞幚?。如果樣本中存在雜質(zhì)或顆粒物，需要先進行離心或過濾處理。

準(zhǔn)備工作

1.孔板室溫平衡1小時

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準(zhǔn)備各型號的移液槍、槍頭、量筒

5.準(zhǔn)備雙蒸水

6.根據(jù)樣本量配好樣本希釋液

7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液

8.若需要提前設(shè)置好振板器、洗板器

9.準(zhǔn)備足夠量的擦手紙

10.根據(jù)說明書提示，溶解標(biāo)準(zhǔn)品

11.配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品

12.配制質(zhì)控品

13.根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果稀釋樣本

14.準(zhǔn)備好封板膜

試劑盒組成

實驗步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標(biāo)板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的抗原和其他雜質(zhì)。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標(biāo)板孔中的非特異性結(jié)合位點，以減少非特異性結(jié)合。

4. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的阻斷液和其他雜質(zhì)。

5. 加樣：加入待測樣本，使其與抗原發(fā)生特異性結(jié)合。

6. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的樣本和其他雜質(zhì)。

7. 加酶標(biāo)抗體：加入酶標(biāo)記的抗體，使其與特異性結(jié)合的樣本中的待測物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。

8. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體和其他雜質(zhì)。

9. 顯色反應(yīng)：加入底物溶液，發(fā)生酶催化反應(yīng)，產(chǎn)生有色產(chǎn)物。

10. 終止反應(yīng)：加入終止液，停止酶催化反應(yīng)。

11. 檢測：用酶標(biāo)儀測定各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)。

注意事項

在進行ELISA檢測時，需要注意以下幾點：

1. 保證試劑盒的質(zhì)量：選擇質(zhì)量可靠、經(jīng)過認證的試劑盒，避免使用過期或質(zhì)量不穩(wěn)定的試劑。

2. 標(biāo)準(zhǔn)化操作：按照試劑盒說明書進行標(biāo)準(zhǔn)化操作，避免操作過程中的人為誤差。

3. 避免交叉污染：在實驗過程中，要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染，以免影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4. 溫度控制：ELISA檢測需要在恒溫條件下進行，因此要確保實驗過程中溫度的穩(wěn)定和準(zhǔn)確性。

5. 空白吸光度值：在實驗過程中，要特別注意空白吸光度值的穩(wěn)定性，避免其對檢測結(jié)果的影響。

6. 實驗數(shù)據(jù)的處理：對實驗數(shù)據(jù)進行正確的處理和分析，包括對異常值的處理、數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換等，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

7. 質(zhì)量控制：在實驗過程中，應(yīng)進行必要的質(zhì)量控制，如定期進行室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評等，以確保實驗室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

結(jié)果判斷

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

[售后]

試劑盒售后：本公司出售的試劑盒均保質(zhì)保量，質(zhì)量問題均可免費退換，另提供免費代測服務(wù)。

細胞售后：

1、細胞運輸丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；

2、細胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照，未告知的視為產(chǎn)品合格。4-10天內(nèi)出現(xiàn)問題，請?zhí)峁┘毎掌图毎霈F(xiàn)問題的照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟，并跟我公司人員及時溝通判定是否重發(fā)，具體可以參照我或者隨貨說明書相關(guān)售后條款。

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