豚鼠胃動(dòng)蛋白2(GKN2) ELISA 試劑盒

· 產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T

· 實(shí)驗(yàn)方法：夾心法

· 檢測(cè)范圍：78-5000pg/mL

· 檢測(cè)限：34.2pg/mL

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· 離開(kāi)了細(xì)胞培養(yǎng)皿，還能愉快做實(shí)驗(yàn)嗎

· 培育皿一般用玻璃或塑料制成，是培育微生物或細(xì)胞培育的常用試驗(yàn)耗材，一般玻璃的能夠用于植物資料、微生物培育和動(dòng)物細(xì)胞的貼壁培育也可能用到。塑料的可能是聚乙烯資料的，合適試驗(yàn)室接種、劃線、分離細(xì)菌的操作，能夠用于植物資料的培育。培育皿易碎，在清洗和運(yùn)用時(shí)要當(dāng)心輕拿輕放，運(yùn)用完后要及時(shí)清洗潔凈，存放在安全、固定的方位。

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· 培育皿的清潔：

· 1、浸泡：新的或用過(guò)的玻璃器皿要先用清水浸泡，軟化和溶解附著物。新玻璃器皿運(yùn)用前得先用自來(lái)水簡(jiǎn)略沖刷，然后用5%鹽酸浸泡過(guò)夜；用過(guò)的玻璃器皿往往附有許多蛋白質(zhì)和油脂，干枯后不易沖刷掉，故用后應(yīng)立即浸入清水中備沖刷。

· 2、沖刷：將浸泡后的玻璃器皿放到洗刷劑水中，用軟毛刷重復(fù)沖刷。不要留死角，并避免損壞器皿外表的光潔度。將沖刷潔凈的玻璃器皿洗凈、晾干，備浸酸。

· 3、.浸酸：浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中，又稱(chēng)酸液，通過(guò)酸液的強(qiáng)氧化作用鏟除器皿外表的可能殘留物質(zhì)。浸酸不該少于六小時(shí)，一般過(guò)夜或更長(zhǎng)。放取器皿要當(dāng)心。

· 4、沖刷：沖刷和浸酸后的器皿都必須用水充沛沖刷，浸酸后器皿是否沖刷的潔凈，直接影響到細(xì)胞培育的勝敗。手藝洗刷浸酸后的器皿，每件器皿至少要重復(fù)“灌水－倒空"15次以上，最后用重蒸水浸洗2－3次，晾干或烘干后包裝備用。

· 培育皿運(yùn)用留意事宜：

· 1、運(yùn)用前通過(guò)清潔消毒，培育皿清潔與否對(duì)作業(yè)影響較大，可影響培育基的酸堿度，若有某些化學(xué)藥品的存在，會(huì)按捺細(xì)菌成長(zhǎng)。

· 2、新購(gòu)的培育皿應(yīng)先用熱水沖刷，再置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%或2%的鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，使游離堿性物質(zhì)除掉，再用蒸餾水沖刷2次。

· 3、若要培育細(xì)菌，再用高壓蒸氣(一般6.8*10的5次方Pa高壓蒸氣)，120℃的溫度下30min滅菌，置室溫中枯燥，或用干熱滅菌，就是將培育皿置于烘箱內(nèi)，溫度控制在120℃左右的情況下保持2h，即可殺死細(xì)菌的胞牙。

· 4、通過(guò)消毒的培育皿才干接種培育運(yùn)用。

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· ELISA試劑盒里都包含了哪些？

· 一、濃縮

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· 由于凈化進(jìn)程中引入的溶劑，可能會(huì)下降待測(cè)組分的濃度或許不適宜直接分析，需求去除悉數(shù)有機(jī)溶劑。即試劑盒前處理進(jìn)程中把樣本在60℃氮?dú)庀麓蹈?，再用?fù)溶液溶解單調(diào)殘留物。

· 濃縮辦法：氮?dú)獯蹈沙s、壓縮空氣吹干除雜。

· 二、均質(zhì)

· ①組織樣本：肉、肝食品類(lèi)切細(xì)，用絞肉機(jī)反復(fù)絞碎，混合均勻。

· ②水產(chǎn)樣本：去除樣品的非食用部分，食用部分切細(xì)，用均質(zhì)器均漿；材料表面較臟時(shí),需適當(dāng)用蒸餾水清洗。

· ③蛋類(lèi)：鮮蛋去殼，蛋黃和蛋白充分混勻。

· ④生果、蔬菜類(lèi)：先用水洗去泥沙，ELISA試劑盒然后除去表面的水分，取食用部分。

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細(xì)胞株與細(xì)胞系有何區(qū)別呢？又有何聯(lián)系呢？

今日我們就詳細(xì)講解下細(xì)胞株與細(xì)胞系。

傳代培育的細(xì)胞是細(xì)胞系；細(xì)胞株就是從細(xì)胞系挑選出來(lái)的 有特別特點(diǎn)的 比如無(wú)線增值的。

細(xì)胞株(Cell Strain)

        經(jīng)過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培育物或細(xì)胞系中取得具有特別性質(zhì)或標(biāo)志物的培育物稱(chēng)為細(xì)胞株(Cell Strain)，也就是說(shuō)，細(xì)胞株是用單細(xì)胞別離培育或經(jīng)過(guò)挑選的辦法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特別性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培育期間一直存在。

細(xì)胞系（cell line）

        原代培育物經(jīng)傳代成功后即為細(xì)胞系(cell line)， 由原先存在于原代培育物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能持續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限， 可稱(chēng)為有限細(xì)胞系(finite cell line)， 如能夠接連培育， 則稱(chēng)為接連細(xì)胞系(continuous cell line)， 培育50代以上并無(wú)限培育下去。

3.競(jìng)爭(zhēng)法ELISA

小分子抗原與半抗原的檢測(cè)方法常用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA，待檢樣本中抗原越多，被結(jié)合的酶標(biāo)抗原的量會(huì)減少，彼此形成競(jìng)爭(zhēng)負(fù)相關(guān)體系，顯色物質(zhì)也就越少，根據(jù)顯色物質(zhì)的比例可擬合得到待測(cè)抗原含量。

4.其他方法

a.免疫抑制法測(cè)ELISA：固相包被抗原，被檢樣本對(duì)底物顯色的抑制程度與樣本中所含抗原的量成正比，二者之差為待測(cè)抗原含量，原理類(lèi)似與競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。

b.阻斷ELISA：目的檢測(cè)特異性抗體，也稱(chēng)為競(jìng)爭(zhēng)ELISA，原理為固相包被抗原，待測(cè)樣本與一抗酶標(biāo)競(jìng)爭(zhēng)孵育，待檢樣本中抗體越多，顯色越淺，反則反之。非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒中涉及該法。

c.此外有用于檢測(cè)IgM抗體的抗體捕捉ELISA，有固相載體改變的Dot-ELISA（硝酸纖維素膜）和C-ELISA（滌綸布），還有技術(shù)分類(lèi)的TRFIA和多因子檢測(cè)等。

ELISA的評(píng)估

ELISA Kit的多指標(biāo)決定了產(chǎn)品質(zhì)量的優(yōu)劣，優(yōu)秀的試劑盒需要對(duì)如下6大項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定評(píng)估，分析如下：

  1、準(zhǔn)確性

ELISA Kit的多指標(biāo)決定了產(chǎn)品質(zhì)量的優(yōu)劣，優(yōu)秀的試劑盒需要對(duì)如下6大項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定評(píng)估，分析如下：

a.回收率：測(cè)定試劑盒對(duì)數(shù)據(jù)真實(shí)性的校準(zhǔn)，過(guò)高或偏低會(huì)產(chǎn)生加樣和假性性的失準(zhǔn)數(shù)據(jù)。

b.線性：測(cè)定試劑盒稀釋液與樣本微環(huán)境的的準(zhǔn)確性，過(guò)高或偏低均會(huì)出現(xiàn)測(cè)定的偏差。

  2、精確度

a.板內(nèi)精確度：評(píng)價(jià)單次實(shí)驗(yàn)中，同一個(gè)已知濃度不同復(fù)孔的差異。

b.板間精確度：評(píng)價(jià)同一樣本，多次實(shí)驗(yàn)的差異。

 3、精密度

檢測(cè)限：能顯著區(qū)分空白信號(hào)的最小信號(hào)值對(duì)應(yīng)的濃度，用于評(píng)估試劑盒的靈敏度，值越低試劑盒靈敏度越高。

  4、特異性

a.交叉反應(yīng)：評(píng)判特異性，不同分子與試劑盒抗體結(jié)合能力，交叉反應(yīng)越大，特異性越差。

b.抗干擾能力：同源物的干擾，內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)的干擾。

  5.天然樣本檢測(cè)性

對(duì)天然樣本及合適的樣本類(lèi)型檢測(cè)分析。對(duì)天然樣本類(lèi)型確定，避免假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。

  6、穩(wěn)定性

試劑盒時(shí)效性和穩(wěn)定性是對(duì)指標(biāo)檢測(cè)的重要保障。穩(wěn)定性越高，試劑盒存儲(chǔ)時(shí)間越久。

ELISA的應(yīng)用

ELISA技術(shù)是特定靶標(biāo)蛋白質(zhì)定量的金標(biāo)準(zhǔn)，提供快速，穩(wěn)定且易于分析的結(jié)果?？梢詫?duì)生物大分子/小分子的定量，對(duì)親和力測(cè)定評(píng)價(jià)或者篩選，還可對(duì)重組蛋白或細(xì)胞因子進(jìn)行活性比對(duì)分析等運(yùn)用。常應(yīng)用于細(xì)胞因子，趨化因子，生長(zhǎng)因子等檢測(cè)，同時(shí)應(yīng)用于癌癥、干細(xì)胞、免疫學(xué)、神經(jīng)學(xué)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等研究領(lǐng)域的靶標(biāo)。

ELISA實(shí)驗(yàn)所用試劑-酶的底物與最后步驟詳解介紹！

1，酶的底物

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HRP的底物

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HRP催化過(guò)氧化物的氧化反應(yīng)，代表性的過(guò)氧化物為H2O2，其反應(yīng)式如下：DH2+ H2O2 D+ H2O

　　上式中，DH2為供氧體，H2O2為受氫體。在ELISA中，DH2一般為無(wú)色化合物，經(jīng)酶作用后成為有色的產(chǎn)物，以便作比色測(cè)定。常用的供氫體有鄰苯二胺(O-phenylenediamine,OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine,TMB)和ABTS[2,2'-azino-di-(3-ethylbenziazobine sulfonate-6)]。

　OPD氧化后的產(chǎn)物呈橙紅色，用酸終止酶反應(yīng)后，在492nm處有最高吸收峰，靈敏度高，比色方便，是HRP結(jié)合物的底物。OPD本身難溶于水，OPD·2HCL為水溶性。曾有報(bào)道OPD有致異變性，操作時(shí)應(yīng)予注意。OPD見(jiàn)光易變質(zhì)，與過(guò)氧化氫混合成底物應(yīng)用液后更不穩(wěn)定，須現(xiàn)配置現(xiàn)用。在試劑盒中，OPD和H2O2一般分成二組分，OPD可制成一定量的粉劑或片劑形式，片劑中含有發(fā)泡助溶劑，使用更為方便。過(guò)氧化氫則配入底物緩沖液中，有制成易保存的濃縮液，使用時(shí)用蒸餾水稀釋。先進(jìn)的ELISA試劑盒中則直接配成含保護(hù)劑的工作濃度為0.02% H2O2的應(yīng)用液,只需加入OPD后即可作為底物應(yīng)用液。

　　TMB經(jīng)HRP作用后共產(chǎn)物顯藍(lán)色，目視對(duì)比鮮明。TMB性質(zhì)較穩(wěn)定，可配成溶液試劑，只需與H2O2溶液混和即成應(yīng)用液，可直接作底物使用。另外，TMB又有無(wú)致癌性等優(yōu)點(diǎn)，因此在ELISA中應(yīng)用日趨廣泛。酶反應(yīng)用HCL或H2SO4終止后，TMB產(chǎn)物由藍(lán)色呈黃色，可在比色計(jì)中定量，最適吸收波長(zhǎng)為405nm。

ABTS雖不如OPD和TMB敏感，但空白值極低，也為一些試劑盒所采用。

　　另一種HRP的底物為3-(4-羥基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenly propionic acid,HPPA]，經(jīng)HRP作用后，產(chǎn)物顯熒光，可用熒光光度計(jì)測(cè)量。用于ELISA的優(yōu)點(diǎn)為可加寬定量測(cè)定的線性范圍。

　　HRP對(duì)氫受體的專(zhuān)一性很高，僅作用于H2O2、小分醇的過(guò)氧化物和尿素過(guò)氧化物(urea peroxide)。H2O2應(yīng)用最多，但尿素過(guò)氧化物為固體，作為試劑較H2O2方便、穩(wěn)定。試劑盒供應(yīng)尿素過(guò)氧化物片劑，用蒸餾水溶解后，在底物緩沖液中密閉、低溫（2～8℃）可穩(wěn)定1年。

豚鼠胃動(dòng)蛋白2(GKN2) ELISA 試劑盒

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AP的底物

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　　AP為磷酸酯酶，一般采用對(duì)硝基苯磷酸酯(p-nitrophenyl phosphate,p-NPP)作為底物，可制成片劑，使用方便。產(chǎn)物為黃色的對(duì)硝基酚，在405nm波長(zhǎng)處有吸收峰。用NaOH終止酶反應(yīng)后，黃色可穩(wěn)定一時(shí)間。AP也有發(fā)熒光底物（磷酸4-甲基傘酮），可用于ELISA作熒光測(cè)定，敏感度較高于用顯色底物的比色法。

2，洗滌液

　　在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水。

3，　酶反應(yīng)終止液

　　常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的最終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。

4，陽(yáng)性對(duì)照品和陰性對(duì)照品

　　陽(yáng)性對(duì)照品(positive control)和陰性對(duì)照品(negative control)是檢驗(yàn)試驗(yàn)有效性的控制品，同時(shí)也作為判斷結(jié)果的對(duì)照，因此對(duì)照品，特別是陽(yáng)性對(duì)照品的基本組成應(yīng)盡量與檢測(cè)標(biāo)本的組成相一致。以人血清為標(biāo)本的測(cè)定，對(duì)照品最好也為人血清，因?yàn)檎Ｈ搜逶诟鞣NELISA模式中可產(chǎn)生不同程度的本底。由于大量正常人血甭較難得到，國(guó)外試劑盒中的對(duì)照品多以復(fù)鈣人血漿(recalcified human plasma)為原料，即在血漿中加入鈣離子，使其中的纖維蛋白質(zhì)凝固，除去凝塊后所得的液體，其組成與血清相似。陰性對(duì)照品須先行檢測(cè)，確定其中不含待測(cè)物質(zhì)。

例如HBsAg檢測(cè)的陰性對(duì)照品中不可含HBsAg，最好抗HBs也是陰性。陽(yáng)性對(duì)照品多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì)，其中加入一定量的待檢物質(zhì)，此量最好在試劑說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明。加入的量應(yīng)與試劑的敏感度相稱(chēng)，在測(cè)定中得到的吸光值與受檢標(biāo)本吸光值比較，可對(duì)標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量有一個(gè)粗略的估計(jì)。國(guó)外檢測(cè)HBsAg的ELISA試劑盒檢測(cè)敏感度約為0.5ng/ml，陽(yáng)性對(duì)照品中含量約為10ng/ml。在對(duì)照品中一般加入抗生素和防腐劑，以利保存。

5，參考標(biāo)準(zhǔn)品

　　定量測(cè)定的ELISA試劑盒（例如甲胎蛋白質(zhì)癌胚抗原測(cè)定等）應(yīng)含有制作標(biāo)準(zhǔn)曲線用的參考標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)包括覆蓋可檢測(cè)范圍的4-5個(gè)濃度，一般均配入含蛋白保護(hù)劑及防腐劑的緩沖液中。