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豬軟骨糖蛋白39(GP39) ELISA 試劑盒 

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T（可拆）

產(chǎn)品數(shù)量：咨詢

產(chǎn)品應用：ELISA實驗

產(chǎn)品貨期：現(xiàn)貨

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

豬軟骨糖蛋白39(GP39) ELISA 試劑盒 

實驗原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種常用的免疫學檢測技術(shù)，其基本原理是利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合反應，通過酶促反應放大信號，檢測微量的蛋白質(zhì)、細胞因子等生物活性物質(zhì)。ELISA實驗中所需的試劑和耗材需滿足一定的質(zhì)量要求，以保證實驗結(jié)果的準確性和可靠性。

準備工作

1.孔板室溫平衡1小時

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準備各型號的移液槍、槍頭、量筒

5.準備雙蒸水

6.根據(jù)樣本量配好樣本希釋液

7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液

8.若需要提前設置好振板器、洗板器

9.準備足夠量的擦手紙

10.根據(jù)說明書提示，溶解標準品

11.配制不同濃度的標準品

12.配制質(zhì)控品

13.根據(jù)預實驗結(jié)果稀釋樣本

14.準備好封板膜

實驗步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的抗原和其他雜質(zhì)。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標板孔中的非特異性結(jié)合位點，以減少非特異性結(jié)合。

4. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的阻斷液和其他雜質(zhì)。

5. 加樣：加入待測樣本，使其與抗原發(fā)生特異性結(jié)合。

6. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的樣本和其他雜質(zhì)。

7. 加酶標抗體：加入酶標記的抗體，使其與特異性結(jié)合的樣本中的待測物質(zhì)發(fā)生反應。

8. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的酶標抗體和其他雜質(zhì)。

9. 顯色反應：加入底物溶液，發(fā)生酶催化反應，產(chǎn)生有色產(chǎn)物。

10. 終止反應：加入終止液，停止酶催化反應。

11. 檢測：用酶標儀測定各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)。

樣本處理

1.組織取出前盡量進行心臟灌流

2.組織表面不能有毛發(fā)等不相關(guān)組分

3.組織稱重(mg)后立即放入EP管中

4.向EP管中加入9倍量的PBS (μL)

5.用勻漿機進行組織勻漿

6.離心

7.小心吸取上清

注意事項

在進行ELISA檢測時，需要注意以下幾點：

1. 保證試劑盒的質(zhì)量：選擇質(zhì)量可靠、經(jīng)過認證的試劑盒，避免使用過期或質(zhì)量不穩(wěn)定的試劑。

2. 標準化操作：按照試劑盒說明書進行標準化操作，避免操作過程中的人為誤差。

3. 避免交叉污染：在實驗過程中，要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染，以免影響檢測結(jié)果的準確性。

4. 溫度控制：ELISA檢測需要在恒溫條件下進行，因此要確保實驗過程中溫度的穩(wěn)定和準確性。

5. 空白吸光度值：在實驗過程中，要特別注意空白吸光度值的穩(wěn)定性，避免其對檢測結(jié)果的影響。

6. 實驗數(shù)據(jù)的處理：對實驗數(shù)據(jù)進行正確的處理和分析，包括對異常值的處理、數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換等，以確保結(jié)果的準確性和可靠性。

7. 質(zhì)量控制：在實驗過程中，應進行必要的質(zhì)量控制，如定期進行室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評等，以確保實驗室檢測結(jié)果的準確性。

結(jié)果分析

根據(jù)試劑盒提供的標準品濃度及對應的OD值，利用標準品繪制的標準曲線，計算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進行數(shù)據(jù)處理，通過計算得到待測樣品的濃度。

試劑盒會出現(xiàn)的問題及解決辦法：

1. 加入反應終止液后，沒有吸光值或吸光值偏低。

a.原因：未加入酶標記物。

解決辦法：請按照操作步驟進行。

b.原因：試劑盒內(nèi)容物未能充分回。

解決辦法：確定試劑盒內(nèi)容物回溫后再進行操作。

c.原因：室溫太低。

解決辦法：若室溫太低(<19℃)，請于操作步驟4，適當延長溫育時間。

d.原因：未使用試劑盒的清洗液清洗。

解決辦法： 請用試劑盒內(nèi)所提供的清洗液清洗。

e.原因：試劑盒已過有效期限。

解決辦法：請更換成仍在有效期限內(nèi)的試劑盒。

2. 標準曲線線性不佳，或是平行性不好。

a.原因：溫育位置避光不好或受到氣流干擾。

解決辦法： 請確認溫育位置既不透光也不透風(如抽屜內(nèi))。

b.原因：操作時間拖太久。

解決辦法：請在方法熟練后再進行操作。

c.原因：微孔間相互污染。

解決辦法： 加樣品時，請小心勿濺出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

d.原因：標準品或酶標記物所加入的量不一致。

解決辦法：請使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。

e.原因：添加樣品或試劑的操作方法不正確。

解決辦法：加樣品或試劑時，吸頭請勿接觸微孔。

f.原因：洗板過程發(fā)生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進行下一步驟)。

解決辦法：請隨時監(jiān)控洗板機洗板過程，洗完后立即進行下一步驟。

3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)。

a.原因：室溫太高(>25℃)。

解決辦法： 若無法降低室內(nèi)溫度，請適當縮短步驟4的溫育時間。

b.原因：底物溶液受到污染。

解決辦法： 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍色，請不要再使用。

c.原因：反應時間超過太久。

解決辦法：請控制反應時間。

d.原因：酶標記物污染了盒內(nèi)其它試劑。

解決辦法：使用過的吸頭應立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無殘留)

4. 陰性標準品的吸光值低于陽性標準品的吸光值。

a.原因：微孔中的試劑未能充分混合。

解決辦法： 試劑加完后，需輕敲盤四周使其充分混合均勻。

b.原因：洗板過程發(fā)生問題(同2-f.)。

解決辦法：請參考2-f.

c.原因：添加樣品或酶標記物的量不一致。

解決辦法： 請參考2-d.

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