植物Rubisco活化酶(RCA)ELISA試劑盒

實驗原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種常用的免疫學(xué)檢測技術(shù)，其基本原理是利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng)，通過酶促反應(yīng)放大信號，檢測微量的蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子等生物活性物質(zhì)。ELISA實驗中所需的試劑和耗材需滿足一定的質(zhì)量要求，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

植物Rubisco活化酶(RCA)ELISA試劑盒

產(chǎn)品包裝：盒裝

性狀：瓶裝液體

規(guī)格：96T/48T

保存條件：2-8℃

保存期限：6個月

運輸條件：2-8℃低溫運輸，用干冰或者冰袋低溫運輸。

   標(biāo)本的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。計算濃度時，稀釋了“N"倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N"。 

   標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。 如配制150 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。 

   生物su標(biāo)記抗體的稀釋原則：臨用前以生物su標(biāo)記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物su標(biāo)記抗體加990μl生物su標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。 

   辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。 

實驗步驟

1. 準(zhǔn)備：準(zhǔn)備好所有試劑、材料和器具。

2. 溫育：將包被有特異性抗體的酶標(biāo)板放入37℃溫箱中溫育30分鐘。

3. 加樣：分別向各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本，輕輕混勻。

4. 溫育：將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育30分鐘。

5. 洗滌：清洗酶標(biāo)板，除去未結(jié)合的抗原抗體。

6. 加酶標(biāo)二抗：向各孔中加入酶標(biāo)二抗，輕輕混勻。

7. 溫育：將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育30分鐘。

8. 洗滌：清洗酶標(biāo)板，除去未結(jié)合的酶標(biāo)二抗。

9. 加底物溶液：向各孔中加入底物溶液，輕輕混勻。

10. 顯色：將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育15分鐘。

11. 終止：向各孔中加入終止液，混勻。

12. 測量：在450nm波長下測量各孔的光密度值（OD值）。

結(jié)果判斷:

1. 每個標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。 

實驗注意事項

1. 抗原和抗體的儲存：應(yīng)嚴(yán)格按照說明書要求存放抗原和抗體，避免反復(fù)凍融和長時間暴露在高溫環(huán)境中。同時要保證試劑盒未過期，以獲得可靠的實驗結(jié)果。

2. 加樣技術(shù)：加樣時應(yīng)保證加入的體積準(zhǔn)確且不產(chǎn)生氣泡，避免加在孔壁的邊緣，以免影響與固相表面的接觸。加樣時應(yīng)在每孔的旁邊放置一個加樣對照孔，以監(jiān)測加樣的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

3. 溫育：溫育是ELISA實驗中的重要步驟，溫育時間和溫度的控制對于抗原抗體反應(yīng)的進行和結(jié)果的影響至關(guān)重要。必須嚴(yán)格按照說明書要求進行溫育，并注意保持恒溫狀態(tài)。

4. 洗滌：洗滌是ELISA實驗中重要的一步，它可以去除未結(jié)合的物質(zhì)，提高檢測的特異性和靈敏度。洗滌時應(yīng)保證每次洗滌時間充足，并更換洗滌液以保證洗滌效果。同時要避免在洗滌過程中產(chǎn)生氣泡，以免影響洗滌效果。

ELISA90分鐘一步法的優(yōu)點

ELISA90分鐘一步法的優(yōu)點主要包括：

1.操作簡單：該方法只需要一步操作即可完成，操作過程簡單明了，易于掌握。

2.快速：ELISA90分鐘一步法可以在短時間內(nèi)完成，適合于大批量樣品的快速檢測。

3.特異性高：該方法采用特定的抗體或抗原進行固定和檢測，因此具有較高的特異性。

4.靈敏度高：ELISA90分鐘一步法具有較高的靈敏度，可以檢測出較低濃度的抗原或抗體。

5.重復(fù)性好：該方法的重復(fù)性較好，結(jié)果較為穩(wěn)定。

6.安全性高：ELISA90分鐘一步法不使用放射性同位素等有害物質(zhì)，因此具有較高的安全性。

需要注意的是，ELISA90分鐘一步法也存在一些缺點，例如可能會受到非特異性干擾因素的影響，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。此外，該方法的試劑成本較高，不適合于小規(guī)模樣品的檢測。

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