人血栓前體蛋白(TpP) ELISA 試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

1. 抗體或抗原的吸附：將待測(cè)抗原或抗體吸附到固相載體上，常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學(xué)基團(tuán)，能夠與待測(cè)抗原或抗體特異性結(jié)合。

2. 酶標(biāo)記的抗體或抗原的結(jié)合：將酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測(cè)抗原或抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物。酶標(biāo)記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力，能夠與待測(cè)抗原或抗體形成穩(wěn)定的復(fù)合物。

3. 底物顯色反應(yīng)：當(dāng)酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物與底物溶液接觸時(shí)，酶能夠催化底物分解，產(chǎn)生顏色變化。通過(guò)測(cè)量顏色的變化程度，可以判斷待測(cè)抗原或抗體的濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本試劑盒的使用說(shuō)明，確保所有材料、器具和試劑準(zhǔn)備齊全。

2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，請(qǐng)務(wù)必遵循實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作，并注意控制實(shí)驗(yàn)條件的一致性。

3. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)勿觸摸酶標(biāo)板上的酶標(biāo)抗體區(qū)域，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后請(qǐng)及時(shí)清洗并整理實(shí)驗(yàn)器具，避免交叉污染。

5. 本試劑盒僅供體外診斷使用，使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，如有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系廠家或?qū)I(yè)技術(shù)人員。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 樣品收集與處理

（1）根據(jù)需要收集不同種類(lèi)的樣品，如血清、血漿、尿液等。

（2）對(duì)于血清和血漿樣品，將采集的血液靜置一段時(shí)間后，離心分離出血清或血漿。

（3）對(duì)于尿液樣品，收集尿液后，可直接進(jìn)行檢測(cè)。

2. 樣品稀釋

根據(jù)試劑盒說(shuō)明，對(duì)需要稀釋的樣品進(jìn)行適當(dāng)比例的稀釋。

3. 加樣

（1）按照試劑盒說(shuō)明，分別將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和待測(cè)樣品加入相應(yīng)的孔中。

（2）每孔加入50μL，輕輕震蕩混勻。

4. 封閉

根據(jù)試劑盒說(shuō)明，加入適量的封閉液，覆蓋板孔，并輕輕震蕩混勻。封閉液一般為含有一定濃度的非特異性結(jié)合配體的溶液，可以降低非特異性結(jié)合的影響。

5. 洗滌

（1）將板孔洗滌液加入到每個(gè)孔中，輕輕震蕩，然后倒掉洗滌液。重復(fù)洗滌3次，每次用洗滌液充分洗滌

（2）最后一次洗滌后，用紙巾輕輕吸干板孔表面的水分。

6. 酶標(biāo)二抗加入及孵育

（1）根據(jù)試劑盒說(shuō)明，將酶標(biāo)二抗加入相應(yīng)的孔中。

（2）孵育一定時(shí)間后，將板孔中的溶液倒掉。

7. 洗滌與顯色

（1）重復(fù)步驟5的洗滌過(guò)程。

（2）加入顯色劑，孵育一定時(shí)間后，將板孔中的溶液倒掉。

8. 終止反應(yīng)與讀數(shù)

（1）加入終止液，終止酶促反應(yīng)。

（2）用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處讀取各孔的光密度值（OD值）。

 人血栓前體蛋白(TpP) ELISA 試劑盒

結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn)，按曲線(xiàn)方程計(jì)算各樣本濃度值。

實(shí)驗(yàn)器材的使用方法

1、塞瓶口時(shí)消毒，右手拇指、食指塞進(jìn)膠皮內(nèi)，將塞旋入消毒瓶口內(nèi)，瓶口再消毒

瓶直立火焰前方，雙手拇指、中指固定瓶位，雙手食指將膠皮外翻，后用消毒紙包裝

2、吸管的使用：右手松夾筒蓋，左手水平抖動(dòng)管筒，管頭端暴露時(shí)取管

筒口消毒套蓋，吸管套吸頭后，火焰上方來(lái)回3次待用

3、 瓶管、蓋的使用要求同塞，需使用同一蓋時(shí)

蓋使用面放在酒精棉球上，套蓋前，蓋使用面火焰消毒

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