人核心蛋白聚糖(DCN) ELISA 試劑盒

實驗原理

1. 抗原抗體反應(yīng)

ELISA試劑盒中的抗原或抗體被固定在固相載體上，當加入待測樣本時，樣本中的抗原或抗體與固相載體上的抗原或抗體發(fā)生反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物。

2. 酶標記物的結(jié)合

將酶標記物與特異性抗體或抗原結(jié)合，形成酶標記抗體或抗原。酶標記物在反應(yīng)中起到催化作用，加速反應(yīng)進程，提高檢測靈敏度。

3. 酶促反應(yīng)

在酶標記物與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合后，加入底物溶液，底物在酶的催化下發(fā)生氧化還原反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化。顏色深淺與待測樣本中的抗原或抗體濃度成正比。

4. 吸光度檢測

將反應(yīng)體系中的吸光度進行測量，通過比較標準品溶液與待測樣本溶液的吸光度值，即可計算出待測樣本中的抗原或抗體濃度。

試劑盒組成

準備工作

1.孔板室溫平衡1小時

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準備各型號的移液槍、槍頭、量筒

5.準備雙蒸水

6.根據(jù)樣本量配好樣本xi釋液

7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液

8.若需要提前設(shè)置好振板器、洗板器

9.準備足夠量的擦手紙

10.根據(jù)說明書提示，溶解標準品

11.配制不同濃度的標準品

12.配制質(zhì)控品

13.根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果稀釋樣本

14.準備好封板膜

實驗步驟

1. 樣品收集與處理

（1）根據(jù)需要收集不同種類的樣品，如血清、血漿、尿液等。

（2）對于血清和血漿樣品，將采集的血液靜置一段時間后，離心分離出血清或血漿。

（3）對于尿液樣品，收集尿液后，可直接進行檢測。

2. 樣品稀釋

根據(jù)試劑盒說明，對需要稀釋的樣品進行適當比例的稀釋。

3. 加樣

（1）按照試劑盒說明，分別將標準品、質(zhì)控品和待測樣品加入相應(yīng)的孔中。

（2）每孔加入50μL，輕輕震蕩混勻。

4. 封閉

根據(jù)試劑盒說明，加入適量的封閉液，覆蓋板孔，并輕輕震蕩混勻。封閉液一般為含有一定濃度的非特異性結(jié)合配體的溶液，可以降低非特異性結(jié)合的影響。

5. 洗滌

（1）將板孔洗滌液加入到每個孔中，輕輕震蕩，然后倒掉洗滌液。重復(fù)洗滌3次，每次用洗滌液充分洗滌

（2）最后一次洗滌后，用紙巾輕輕吸干板孔表面的水分。

6. 酶標二抗加入及孵育

（1）根據(jù)試劑盒說明，將酶標二抗加入相應(yīng)的孔中。

（2）孵育一定時間后，將板孔中的溶液倒掉。

7. 洗滌與顯色

（1）重復(fù)步驟5的洗滌過程。

（2）加入顯色劑，孵育一定時間后，將板孔中的溶液倒掉。

8. 終止反應(yīng)與讀數(shù)

（1）加入終止液，終止酶促反應(yīng)。

（2）用酶標儀在450nm波長處讀取各孔的光密度值（OD值）。

人核心蛋白聚糖(DCN) ELISA 試劑盒

結(jié)果判斷

1. 每個標準品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。

2. 推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標準曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標準曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

3. 若樣品OD值高于標準曲線上限，應(yīng)適當稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。 

相關(guān)產(chǎn)品

免責聲明

試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或生物體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔， 本公司概不負責。

嚴格按照說明書操作，不同批號不可交換使用，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。