人信號素4D(SEMA4D) ELISA 試劑盒    

實驗原理

1. 抗體或抗原的吸附：將待測抗原或抗體吸附到固相載體上，常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學(xué)基團(tuán)，能夠與待測抗原或抗體特異性結(jié)合。

2. 酶標(biāo)記的抗體或抗原的結(jié)合：將酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測抗原或抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物。酶標(biāo)記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力，能夠與待測抗原或抗體形成穩(wěn)定的復(fù)合物。

3. 底物顯色反應(yīng)：當(dāng)酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物與底物溶液接觸時，酶能夠催化底物分解，產(chǎn)生顏色變化。通過測量顏色的變化程度，可以判斷待測抗原或抗體的濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

準(zhǔn)備工作

1.孔板室溫平衡1小時

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準(zhǔn)備各型號的移液槍、槍頭、量筒

5.準(zhǔn)備雙蒸水

6.根據(jù)樣本量配好樣本xi釋液

7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液

8.若需要提前設(shè)置好振板器、洗板器

9.準(zhǔn)備足夠量的擦手紙

10.根據(jù)說明書提示，溶解標(biāo)準(zhǔn)品

11.配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品

12.配制質(zhì)控品

13.根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果稀釋樣本

14.準(zhǔn)備好封板膜

操作步驟

1. 包被：將抗原溶液加入聚苯乙烯酶標(biāo)板孔中，包被抗原，37℃孵育1小時。

2. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的抗原和其他雜質(zhì)。

3. 阻斷：加入阻斷液，37℃孵育30分鐘，以封閉酶標(biāo)板上的非特異性結(jié)合位點。

4. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的阻斷液和其他雜質(zhì)。

5. 加樣：加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本，37℃孵育1小時。

6. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)。

7. 加酶標(biāo)抗體：加入酶標(biāo)記的抗體，37℃孵育1小時。

8. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。

9. 顯色：加入TMB底物溶液，37℃孵育15-30分鐘。

10. 終止反應(yīng)：加入終止液，停止顯色反應(yīng)。

11. 檢測：在450nm波長下讀取吸光度值（OD值）。

注意事項

1. 實驗前請仔細(xì)閱讀本試劑盒的使用說明，確保所有材料、器具和試劑準(zhǔn)備齊全。

2. 為保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，請務(wù)必遵循實驗步驟進(jìn)行操作，并注意控制實驗條件的一致性。

3. 實驗過程中請勿觸摸酶標(biāo)板上的酶標(biāo)抗體區(qū)域，以免影響實驗結(jié)果。

4. 實驗結(jié)束后請及時清洗并整理實驗器具，避免交叉污染。

5. 本試劑盒僅供體外診斷使用，使用前請仔細(xì)閱讀說明書，如有疑問請及時聯(lián)系廠家或?qū)I(yè)技術(shù)人員。

相關(guān)產(chǎn)品

免責(zé)聲明

試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或生物體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān)， 本公司概不負(fù)責(zé)。

嚴(yán)格按照說明書操作，不同批號不可交換使用，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔(dān)。

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