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人腫瘤蛋白p63(TP63) ELISA 試劑盒
實驗原理
1. 抗體或抗原的吸附:將待測抗原或抗體吸附到固相載體上,常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學基團,能夠與待測抗原或抗體特異性結合。
2. 酶標記的抗體或抗原的結合:將酶標記的抗體或抗原與待測抗原或抗體結合,形成酶標記的抗原-抗體復合物。酶標記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力,能夠與待測抗原或抗體形成穩(wěn)定的復合物。
3. 底物顯色反應:當酶標記的抗原-抗體復合物與底物溶液接觸時,酶能夠催化底物分解,產(chǎn)生顏色變化。通過測量顏色的變化程度,可以判斷待測抗原或抗體的濃度。
實驗步驟
1. 樣品收集與處理
(1)根據(jù)需要收集不同種類的樣品,如血清、血漿、尿液等。
(2)對于血清和血漿樣品,將采集的血液靜置一段時間后,離心分離出血清或血漿。
(3)對于尿液樣品,收集尿液后,可直接進行檢測。
2. 樣品稀釋
根據(jù)試劑盒說明,對需要稀釋的樣品進行適當比例的稀釋。
3. 加樣
(1)按照試劑盒說明,分別將標準品、質(zhì)控品和待測樣品加入相應的孔中。
(2)每孔加入50μL,輕輕震蕩混勻。
4. 封閉
根據(jù)試劑盒說明,加入適量的封閉液,覆蓋板孔,并輕輕震蕩混勻。封閉液一般為含有一定濃度的非特異性結合配體的溶液,可以降低非特異性結合的影響。
5. 洗滌
(1)將板孔洗滌液加入到每個孔中,輕輕震蕩,然后倒掉洗滌液。重復洗滌3次,每次用洗滌液充分洗滌
(2)最后一次洗滌后,用紙巾輕輕吸干板孔表面的水分。
6. 酶標二抗加入及孵育
(1)根據(jù)試劑盒說明,將酶標二抗加入相應的孔中。
(2)孵育一定時間后,將板孔中的溶液倒掉。
7. 洗滌與顯色
(1)重復步驟5的洗滌過程。
(2)加入顯色劑,孵育一定時間后,將板孔中的溶液倒掉。
8. 終止反應與讀數(shù)
(1)加入終止液,終止酶促反應。
(2)用酶標儀在450nm波長處讀取各孔的光密度值(OD值)。
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無 |
標準品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無 |
樣本xi釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體 | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
人腫瘤蛋白p63(TP63) ELISA 試劑盒
注意事項
1. 試劑盒應存放在干燥、陰涼處,避免陽光直射和高溫。
2. 試劑盒中的試劑只能一次性使用,不能重復使用。
3. 在使用試劑盒過程中應保持清潔衛(wèi)生,防止交叉污染。
4. 對于異常結果,應進行復檢和確認,以保障檢測結果的準確性。
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