查找:乙醇含量測(cè)試盒100管/48樣 微量法

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注?意:正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

酒是含酒精(乙醇)飲料的統(tǒng)稱,乙醇是酒的主要成分,是衡量酒質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。我國(guó)是 上Z早發(fā)明釀酒的國(guó)家,也是酒類產(chǎn)品消費(fèi)大國(guó),其消費(fèi)量居 zhi首。因此,快速、準(zhǔn)確測(cè)定酒中乙醇含量,對(duì)于確保酒的質(zhì)量和保護(hù)消費(fèi)者的健康具有重大意義。

測(cè)定原理:

乙醇在乙醇脫氫酶的催化下氧化脫氫生成乙醛,同時(shí),NAD 被還原生成 NADH,NADH 在 1-mPMS 的作用下使 WST-8 顯橙黃色,通過(guò) 450 nm 下測(cè)定吸光值變化可測(cè)得乙醇含量。

需自備的儀器和用品:

酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96 孔板、研缽、冰、蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一:液體 12 mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:粉劑×1 瓶, -20℃保存;臨用前加入 6 mL 試劑三充分溶解待用,用不完的試劑分裝后-20℃保存;

試劑三:液體 10 mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:液體 1.5mL×1 管, 4℃避光保存。

乙醇提取:

1.    組織:按照組織質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 蒸餾水),進(jìn)行勻漿,8000g,25℃離心 10min,取上清待測(cè)。

2.   細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):蒸餾水體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 蒸餾水),超聲波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次), 8000g,25℃離心 10min,取上清待測(cè)。

3.   血清(漿)等液體樣品:直接測(cè)定。

測(cè)定步驟:

1.   酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 450nm。

2.   工作液的配制:臨用前按照樣本數(shù)量,按以下比例配制工作液

        試劑一      100
        試劑二      50
        試劑四      10
      

3.   樣本測(cè)定按下表在96孔板中加入如下試
 樣本            40
 測(cè)訂工作液 160

乙醇含量計(jì)算:

 標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.0256x + 0.0055

R2 =   0.9991;

x 為乙醇含量(μmol/mL),y 為吸光值差值△A。

 

1.   按照血清(漿)體積計(jì)算

乙醇含量(μmol/mL)= (△A-0.0055)÷0.0256

=39.1×(△A-0.0055)

 

2.   按照樣品質(zhì)量計(jì)算

乙醇含量(μmol/g 鮮重)= [ (△A-0.0055)÷0.0256×V1]÷(W ×V1÷V2)

=  39.1×(△A-0.0055)÷W

 

3.   按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

乙醇含量(μmol/104 cell)= [ (△A-0.0055)÷0.0256×V1]÷(500×V1÷V2)

=0.078×(△A-0.0055)

 

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.04mL;V2:加入提取液體積,1 mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn);

注意事項(xiàng):

測(cè)定前取 1-2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),若△A﹥0.3 或乙醇含量﹥10μmol/mL,需將樣本用蒸餾水稀釋后再測(cè)定,以確保測(cè)定的準(zhǔn)確性。

Z低檢測(cè)限:0.02μmol/mL。

乙醇含量測(cè)定試劑盒僅供科研!

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