抗體操作中還應(yīng)注意如下問題：

1、熱處理后應(yīng)注意自然冷卻。

2、熱處理時(shí)要防止切片干燥。

3、應(yīng)根據(jù)不同的抗體選擇合適的抗原修復(fù)方法。

4、同一批抗原的檢測(cè)所用溫度和時(shí)間確保一致。

5、注意形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)的改變（一般經(jīng)高溫修復(fù)后胞漿會(huì)明顯被破壞，對(duì)細(xì)胞核的影響較大，會(huì)出現(xiàn)核破裂與蘇木到淡染等現(xiàn)象；而經(jīng)酶水解的切片，其細(xì)胞漿破壞視消化時(shí)間長短而異，但核破壞較輕）。

6、如果在常用的緩沖液中無法實(shí)現(xiàn)抗原修復(fù)，或經(jīng)修復(fù)后的抗原定位發(fā)生改變，可改用一些不常用的緩沖液，或加一些螯合劑，如EDTA等可改善某些抗原的修復(fù)。

用于免疫酶組織化學(xué)抗原修復(fù)的消化酶很多，所選酶的種類、使用的濃度、pH、消化時(shí)間及溫度等均要視組織固定的不同，所檢測(cè)抗原的性質(zhì)與組織類型的不同而異，應(yīng)通過預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索確定。

使用酶消化的原則：

胰蛋白酶和蛋白酶K一般用于細(xì)胞內(nèi)抗原，如Keratin,CEA與GFAP等。胃蛋白酶則主要用于細(xì)胞間質(zhì)抗原的檢測(cè)?？贵w如fibronectin,Laminin與各型膠原等。

一般來說，消化時(shí)間和組織切片固定的長短呈正比。在用酶消化與熱修復(fù)后均不能獲得結(jié)果的前提下使用抗原修復(fù)與酶消化結(jié)合的方法，有時(shí)會(huì)取得較為滿意的結(jié)果。

一般常用蛋白酶K和微波相結(jié)合，但應(yīng)注意，無論何種性質(zhì)的抗原檢測(cè)均可能會(huì)在核內(nèi)出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。因此必須要做對(duì)照。